Диагностика и профилактика вирусных болезней пчел
В настоящее время известно более 20 вирусов медоносных пчел. Вызываемые ими болезни очень разнообразны, начиная от вируса мешотчатого расплода, открытого почти сто лет назад, и заканчивая недавно открытыми израильским вирусом острого паралича и иридовирусом, которые, по мнению некоторых американских ученых, в последние годы вызывают так называемый коллапс пчелиных семей в США.
Появились неизвестные ранее пути заражения пчел вирусами за счет появления новых паразитов. Распространившийся более 40 лет назад клещ варроа стал активным переносчиком вирусов острого паралича, деформации крыльев и других вирусов. Нозема, паразитирующая в кишечнике пчелы, способствует заражению пчел вирусом черных маточников, нитевидным и иридовирусом. Теперь уже экспериментально доказано, что вирус мешотчатого расплода может передаваться пчелиной маткой через яйцо, при этом матка выглядит совершенно здоровой.
Вирусы широко распространены среди пчел. На одной пасеке может быть сразу несколько вирусов, но чаще всего пчеловод об этом не догадывается. Например, при легком течении мешотчатого расплода пчеловод обычно не замечает гибели 5% личинок, так как пчелы оперативно их удаляют. Однако это сказывается на продуктивности семей пчел. Пчеловод начинает лечение болезни, когда гибель личинок от мешотчатого расплода становится массовой и пчелы не успевают удалять их из ячеек или когда бескрылые взрослые пчелы, пораженные вирусом деформации крыльев, в большом числе ползают по пасеке.
В справочниках по пчеловодству приводятся клинические признаки некоторых вирусных болезней пчел. Однако диагностика по клиническим признакам может использоваться только как предварительная. Например, после гибели личинок пчел от вируса Острого паралича или вируса мешотчатого расплода в процесс могут включаться бактерии — утилизаторы мертвых тканей, такие же, как при европейском гнильце. При наличии этих бактерий и клинических признаков, сходных с европейским гнильцом, диагноз может быть поставлен неправильно, соответственно таковым будет и лечение. В настоящее время рекомендации по диагностике европейского гнильца радикально переработаны. Заключения об установлении европейского гнильца, основанные на устаревших рекомендациях, во многих случаях не соответствуют действительности.
Разработано много методов диагностики вирусных болезней пчел. Они требуют квалифицированного персонала и лабораторных условий, однако в настоящее время практически невозможно получить квалифицированную услугу по диагностике и лечению болезней пчел. Пчеловоды, как правило, сами ставят диагноз и сами лечат пчел. Процесс лечения обычно не вызывает затруднений, диагноз на варроатоз или аскосфероз ставят правильно, а вот диагностику, требующую лабораторных исследований, пчеловод провести не в состоянии.
Выход может быть найден в создании тест-систем, не требующих квалификации и лабораторного окружения. В пасечных условиях возможно использование диагностических тестов на основе стандартной технологии иммунохроматографических стрип-тестов для диагностики вирусных и бактериальных болезней. Время анализа при помощи такого теста не более 30 мин. Число основных манипуляций не более двух. Стабильность изделия при комнатной температуре более года. Специфичность более 95%. Тест представляет собой небольшой пластмассовый чип с отверстием для внесения материала и шкалой из пористой мембраны. Такие тесты выпускает английская фирма Vitа для диaгностики американского и европейского гнильцов (рис. 1).
В настоящее время фирма «Диафарм» при участии ВНИИ экспериментальной ветеринарии приступает к разработке таких тест-систем. Предполагается, что сих помощью можно будет проводить дифференциальную диагностику болезней пчелиного расплода (мешотчатого расплода, Острого паралича, американского и европейского гнильцов). Предварительные расчеты показывают, что себестоимость такой тест-системы будет не более 60 руб.
При постановке диагноза больную личинку или куколку извлекают и помещают в флакон с буфером, содержащим детергенты и металлические шарики (входят в набор), встряхивают, при этом происходит измельчение и экстрагирование тканей личинки или куколки. Затем прилагаемой пипеткой полученный экстракт вносят через отверстие в чипе на подушку для образца (рис. 2).
Экстракт двигается по направлению к абсорбирующей подушке. При прохождении экстракта через подушку с конъюгатом из нее вымывается содержащийся в ней конъюгат соответствующих антител с коллоидным золотом. Во время дальнейшего движения жидкости происходит образование комплексов конъюгата антител с соответствующими антигенами (если они есть в экстракте).
Образовавшиеся комплексы связываются с антителами, иммобилизованными на мембране, на линии теста. В результате появляется полоска o коричневого цвета. Контролем служит контрольная линия, расположенная дальше, на которой
иммобилизован искомый антиген. Несвязавшийся конъюгат на контрольной линии также долженобразовать полоску коричневого цвета. Положительным считается результат, когда образуются две полоски (на линии теста и на контрольной линии). При отрицательном результате появляется только одна контрольная полоска. Полное отсутствие полос свидетельствует о неправильно проведенных манипуляциях и необходимости повторного исследования.
Вирусологические исследования особенно необходимо проводить в хозяйствах, которые занимаются продажей семей пчел и маток. При выявлении семей-вирусоносителей не следует использовать их при племенном разведении. Мероприятия по борьбе с вирусными болезнями пчел должны быть направлены на уничтожение паразитов, распространяющих эти болезни, и на профилактику и лечение противовирусным препаратом эндоглюкин.
Эндоглюкин — усовершенствованная форма препарата на основе эндонуклеазы, который в настоящее время производится фирмой «Диафарм». Препараты на основе ферментов эндонуклеазы и рибонуклеазы уже много лет используются для профилактики и лечения вирусных болезней пчел. При хроническом параличе пчел рибонуклеазу испытывали В.И.Полтев, П.Л.Талпалацкий, Р.И.Салганик (1972), эндонуклеазу и эндоглюкин при филамeнтoвирозе — Ю.М.Батуев (1992).
Известно, что у многих животных и человека одним из факторов противовирусной защиты является интерферон. Его действие основано на активации собственных эндонуклеаз, с помощью которых организм защищается от вирусов. Введение нуклеаз извне позволяет быстрее включить этот противовирусный механизм.
Нуклеазы — ферменты, которые катализируют расщепление фосфорно-диэфирных связей между нуклеотидами (основными «кирпичиками») в молекулах нуклеиновых кислот. Расщепление нуклеиновых кислот нуклеазами на фрагменты разрушает целостность информации, которую несут полинуклеотиды, после чего они уже не кодируют синтез новых молекул вирусных нуклеиновых кислот и вирусных белков. Следовательно, нуклеазы могут таким образом прерывать размножение вирусов.
Вирусные нуклеиновые кислоты в составе вирионов одеты белковыми оболочками (чехлами), которые защищают их от действия повреждающих внешних факторов, и в том числе, от нуклеаз. Целые вирусные частицы не чувствительны к действию нуклеаз.
Когда вирус проникает в клетку, он сбрасывает защитный белковый чехол, и вирусная нуклеиновая кислота может стать на этот период доступной повреждающему действию нуклеазы. Введенные в этот период извне нуклеазы гидролизуют вирусные нуклеиновые кислоты. Расщепление вирусных нуклеиновых кислот препятствует размножению вирусов.
Если введенные извне нуклеазы, проникнув в зараженную клетку, разрушат молекулы вирусных нуклеиновых кислот, то не могут ли они при этом расщепить и собственные клеточные нуклеиновые кислоты? Как показывает практика, этого не происходит.
Клеточные нуклеиновые кислоты не повреждаются попадающими извне нуклеазами, если эти ферменты проникают в клетку путем пиноцитоза, захвата их клеточными мембранами и заключения в пиноцитозную вакуоль. В этом случае нуклеазы будут изолированы внутри клетки. Этот путь является основным или даже единственным способом попадания больших молекул в клетку из межклеточной среды.
Поскольку вирус попадает в клетку также путем активного захвата (через рецепторы), то при одновременном нахождении вируса и нуклеазы в межклеточном пространстве они могут быть вместе захвачены клеткой. В этом случае внутри пиноцитозных вакуолей будет происходить их взаимодействие: атака нуклеазой вирусной нуклеиновой кислоты, освобождающейся от белкового чехла. Нуклеаза будет расщеплять вирусные нуклеиновые кислоты и тормозить размножение вирусов, не повреждая клеточные нуклеиновые кислоты и не нарушая жизнь клетки.
Кроме противовирусного действия было отмечено стимулирующее действие эндоглюкина на пасеках, где не было явных признаков вирусных болезней. Объяснить это явление можно тем, что на многих пасеках вирусы циркулируют в скрытой (латентной) форме, но тем не менее сдерживают развитие семей пчел в весенний период, а летом снижают их продуктивность. Подавляя размножение латентных вирусов, эндоглюкин способствует более быстрому развитию семей пчел. Внешне это выглядит как стимулирующий эффект.
Ю.С.Аликин, А.З.Афиногенов, Ю.М.Батуев, О.Ф.Гровов, В.П.Клименко, Л.П.Сенженко, Л.В.Келин, А.В.Тронин
НИКТИ БАВ, ГНЦ ВБ «Вектор», ООО «Диафарм», г. Бердск, ГНУ «ВНИИ экспериментальной ветеринарии», Москва
Смотрите так же
Вирус деформации крыла
Вирус острого паралича
Вирус хронического паралича
Вирус мешотчатого расплода
Вирус черных маточников
